عنوان
ناك اوت ژن ليپوكالين-2 با فناوري CRISPR/Cas9 در رده ي سلولي سرطان پروستات موسوم بهPC3 و بررسي آپوپتوز، مهاجرت سلولي و ميزان حساسيت به سيس پلاتين در محيط In vitro
محل تحصيل
لنگرود
چكيده
مقدمه: سرطان پروستات يكي از شايع ترين و كشنده ترين سرطان ها در بين مردان در جهان به حساب مي آيد كه سالانه صدها هزار نفر را به كام مرگ مي كشاند. علي رغم وجود روش هاي متعدد درماني، هيچ كدام از آن ها كامل نبوده و عوارض جانبي فراواني را به همراه دارند. ابداع رويكرد ها و روش هاي درماني جديد براي اين بيماران همواره مدنظر محققين بوده است كه با توجه به ماهيت ژنتيكي اين بيماري، هدف قرار دادن ژن هاي دخيل در ايجاد و گسترش آن يكي از رويكردهايي است كه در دهه ي اخير توجه بسياري از محققين را به خود جلب كرده است. ليپوكالين-2 يكي از ژن هايي است كه بيان آن در سرطان پروستات به طور قابل توجهي افزايش يافته و سبب پيشروي بيشتر اين بيماري مي گردد. بنابراين هدف قرار دادن اين ژن در سلول هاي سرطاني مي تواند راهكاري مناسب در جهت جلوگيري از پيشرفت سرطان باشد.
روش كار: بيان ژن ليپوكالين-2 در رده ي سلولي PC3 به كمك فناوري كريسپر ناك اوت گرديد. براي ترانسفكشن سازه هاي ژني مربوطه از محلول ترانسفكشن Extremegen HP، براي تاييد ناك اوت شدن ژن ليپوكالين-2 در سطح رونويسي از روش RT-PCR و در سطح ترجمه از روش هاي ايمونوسيتوشيمي و ELISA استفاده شد. رشد سلولي (با/بدون سيس پلاتين) با روش هاي WST-1 و Colony Formation Assay، مهاجرت سلولي با تكنيك هاي خراش و ترانسول، و آپوپتوز با روش هاي TUNEL و ELISA مورد سنجش قرار گرفت.
نتايج: ناك اوت شدن بيان ژن ليپوكالين-2 به ميزان قابل توجهي رشد سلول هاي PC3 را سركوب كرده و همچنين ميزان حساسيت اين سلول ها در برابر داروي شيمي درماني سيس پلاتين را به طور معني داري افزايش داد. به علاوه نتايج تست هاي آپوپتوز نشان دادند القاي آپوپتوز توسط سيس پلاتين در رده ي ناك اوت در مقايسه با رده ي كنترل بيشتر مي باشد. نتايج تست هاي مهاجرت نيز ثابت كردند كه ناك اوت شدن بيان ژن ليپوكالين-2 قدرت مهاجرت سلول هاي PC3 را نيز به ميزان چشم گيري مهار كرد.
نتيجه گيري: نتايج اين مطالعه علاوه بر اثبات دوباره ي ارتباط مستقيم بين بيان ليپوكالين-2 و پيشرفت سرطان پروستات، پيشنهاد مي كند هدف قرار دادن اين ژن توسط روش نوين كريسپر مي تواند رويكردي جديد و موثر براي درمان اين بيماري و همچنين ارتقاي اثرگذاري شيمي درماني با سيس پلاتين باشد.
كلمات كليدي: ليپوكالين-2، سرطان پروستات، CRISPR/Cas9
شماره ركورد
32551
دانشگاه
علوم پزشكي گيلان