طراحي نانومولكول كايمري از آپتامر اختصاصي نوكلئولين وmiRNA let-7d و بررسي اثر آن برتكثيرسلولي در رده‌ي سلولي سرطان معده MKN-45

لنگرود

زيست فناوري پزشكي

مقدمه: سرطان معده به عنوان يكي از شايع‌ترين سرطان‌ها در دنيا و ايران محسوب مي‌گردد. به دليلِ هزينه‌ي بالا و عوارض ناشي از غيرهدفمند بودنِ روش‌هاي رايجى مانند شيمي‌درماني، محققين به دنبال يافتن روش‌هاي درماني‌ِ كم هزينه و موثرتر مي‌باشند. ژن‌درماني و استفاده از miRNAها و همچنين روش‌هاي هدفمند كردن آن‌ها توسط ليگاندهاي مولكولي، نظير آپتامرها، امروزه مورد توجه محققين قرار گرفته است. در اين پژوهش براي اولين بار كنژوگه‌اي بر پايه‌يِ آپتامر AS1411 ويژه‌ي گيرنده‌ي نوكلئولين (پروتئيني كه در بسياري از انواع تومورها افزايش بيان دارد)، جهت هدفمندسازي miRNA let-7d طراحي شد و تأثير آن بر سرطان معده رده‌ي سلولي MKN-45، كه بيان كننده‌ي سطح بالايي از پروتئين نوكلئولين مي‌باشد، مورد بررسى قرار گرفت.‌ مواد و روش‌ها: كنژوگه‌يِ Apt-miR توسط دو روش؛ اول بر اساس لينكر شيميايي SMCC به روش كووالانسي (كنژوگه‌ي 1) و دوم لينكر قطعه‌ي چسبنده از جنس نوكلئوتيد به روش غيركووالانسي (كنژوگه‌ي 2)، تشكيل شد و توسط الكتروفورزِ ژل‌ پلي‌آكريل‌آميد مورد تاييد قرار گرفت. پس‌از تيمار سلول‌ها، سميت كنژوگه‌ها بر روي سلول‌هاي MKN-45 در مقايسه با سلول‌هاي نرمال HDF به روش MTT با ارزيابيِ ميزان بقايِ سلولي بررسي شد. در نهايت، ورود اختصاصي كنژوگه‌هايِ تشكيل شده در دو رده‌يِ سلوليِ سرطاني و نرمال توسط روش qRT-PCR مورد بررسي قرار گرفت. يافته‌ها: پس‌از تاييد كنژوگه‌ي تشكيل شده، براساس پاسخ‌هاي بدست آمده از تست MTT، ميزان بقايِ سلول‌هاي سرطانيِ تحت تأثير كنژوگه به صورت معناداري نسبت به شكلِ منفردِ آپتامري و let-7d كاهش پيدا كرده و IC50 براي كنژوگه‌ي 1 و 2 به ترتيب 200 و 250 نانومولار مشخص گرديد. مجموع نتايج نشان داد كه سميتي از كنژوگه‌ها بر روي سلول‌هاي نرمال HDF ديده نشده و همچنين سطح بيانِ let-7d در سلول‌هاي سرطاني MKN-45 نسبت به HDF با اختلاف معني¬داري افزايش نشان داد كه نشان دهنده‌ي هدفمند بودن روش استفاده شده است. ميزان پايداري در سرمِ انساني براي كنژوگه‌ي 1 و 2 به ترتيب 8 و 4 ساعت تعيين شد. نتيجه‌گيري: به طور خلاصه، با افزايش miR-let-7d در رده سلولي MKN-45 به موازات كاهش بقاي سلولي، نشان داده شد كه اين miRNA نقشِ سركوبگر توموري داشته و آپتامر AS1411 به واسطه‌ي گيرنده‌ي نوكلئولين سطح سلول‌هاي سرطاني، ابزار مناسبي براي رساندن هدفمند miR-let-7d به اين دسته از سلول¬ها محسوب مي¬شود. علاوه‌بر اين، با كاهش بقايِ سلول‌هاي سرطانيِ تحت تيمار اين كنژوگه و در نظر گرفتن فاكتورهايي نظير دوز پايين، ايمنوژنسيته‌ي كمتر و همچنين پايداري مناسب، كنژوگه‌ي تشكيل شده با در نظر گرفتن بررسي‌هاي بيشتر در آينده مي‌تواند به عنوان كانديداي درماني بالقوه¬اى براى سرطان معده در نظر گرفته شود. واژگان كليدي: بيوكنژوگه، آپتامر، miRNA، سرطان معده، ژن‌درماني

31105

پيراپزشكي شرق گيلان

علوم پزشكي گيلان

نيكوكار، ايرج Nikukar, Iraj , هدايتي، مجتبي Hedayati, Mojtaba

خانكي، كوروش , تبرزد، مريم