بيان و خالص‌سازي Super Renilla Luciferase8-(Linker-B72)2 متصل‌شونده به گانگليوزيد GM1 و ارزيابي الحاق آن به يك رنگ فلورسنت

كارشناسي ارشد

بنا به گزارش سازمان بهداشت جهاني در سال 2023 ميلادي حدود 17.5% از افراد بالغ در سراسر دنيا با مشكل ناباروري درگير هستند، كه در حدود 20% موارد عامل اصلي و در حدود 40-30% موارد عامل موثر در ناباروري مردان هستند. يكي از عوامل ايجاد ناباروري در مردان اختلالات عملكردي اسپرم است. يكي از موارد در اختلالات عملكردي اسپرم اختلال در وقوع ظرفيت‌پذيري در اسپرم است. ظرفيت‌پذيري فرآيندي است كه بعد از انزال در دستگاه توليدمثلي جنس مونث رخ مي‌دهد. طي اين فرآيند اسپرم فاقد توانايي بارورسازي تخمك به اسپرم با توانايي بالقوه‌ي بارورسازي تخمك تبديل مي‌شود. طي وقوع فرآيند ظرفيت‌پذيري گانگليوزيدهاي GM1 در غشاي اسپرم دچار نوآرايي شده و در ناحيه رأسي- مياني غشاي اسپرم تجمع مي‌يابند كه از اين مسئله مي‌توان به عنوان نشانگري براي تشخيص وقوع ظرفيت‌پذيري استفاده كرد. با توجه به اهميت مسئله‌ ظرفيت‌پذيري اسپرم و اختلالات آن، توسعه روش‌هاي تشخيصي دقيق و كارآمد در اين حوزه ضروري است. در اين پژوهش تلاش شد تا زيست‌حسگري مبتني بر آنزيم رنيلا لوسيفراز به نام Super Renilla Luciferase8-(Linker-B72)2 با هدف اتصال به گانگليوزيد GM1 توسعه يابد. نتايج حاصل از ارزيابي بيوسنسور طراحي شده نشان داد كه اتصال پپتيد B72 بر عملكرد آنزيم Super Renilla Luciferase8 تأثيري نداشته است. نتايج به دست آمده از مطالعات ميكروسكوپ فلورسنت نشان داد كه اتصال آنزيم Super Renilla Luciferase8 به پپتيد B72 باعث كاهش تمايل اتصال آن به گانگليوزيد GM1 شده است. مطالعات تشخيص سلولي نشان داد در غلظت nM10 بيوسنسور تفاوت معناداري بين سيگنال لومينوسنت سلول اسپرم در حالت ظرفيت‌پذيري نسبت به حالت عدم ظرفيت‌پذيري وجود دارد. علي‌رغم ويژگي‌هاي مثبتي كه اين زيست‌حسگر تاكنون نشان داده‌است ارائه اين سنجش به عنوان يك روش تشخيصي در حوزه‌ي باليني نيازمند مطالعات و بهينه‌سازي‌هاي بيشتر جهت كاربرد‌هاي آينده است. به طور كلي در اين پژوهش تلاش شد زيست‌حسگري طراحي شود كه توانايي تشخيص ظرفيت‌پذيري در اسپرم انسان دارد و از لحاظ باليني كارآمد است.

231773

دانشگاه اصفهان

محبوبه نظري

بيوشيمي

رحمان امام زاده