طراحي بيوانفورماتيكي و ارزيابي آزمايشگاهي يك واكسن پپتيدي با استفاده از آنتي¬ژن ساركوما NY-SAR-35 همراه با ادجوانت ميكروبي براي درمان سرطان پستان

دكتري

سرطان پستان، شايع‌ترين نوع سرطان در ميان زنان است كه از رشد، تكثير و تهاجم بي‌رويه سلول‌ها ناشي مي‌شود. طراحي يك واكسن ضد سرطان به يكي از محورهاي اصلي تحقيق در زمينه بيوتكنولوژي پزشكي و ايمونولوژي تبديل شده است. پژوهش حاضر با هدف معرفي يك واكسن پپتيدي مبتني بر اپي¬توپ¬هاي مشتق¬ شده از آنتي¬ژن سرطان/بيضه NY-SAR-35ضد سرطان پستان انجام شد. به اين منظور ابتدا توالي آنتي¬ژن NY-SAR-35 از UniProt گرفته شد. اپي¬توپ¬هاي سلول T با استفاده ازIEDB پيش¬بيني شدند و از نظر آنتي¬ژنيسيته، حساسيت¬زايي، سميت سلولي، پايداري و توانايي تحريك IFN-γ و IL-4 ارزيابي شدند. بهترين اپي¬توپ¬ها براي استفاده در سازه نهايي انتخاب شدند. اپي¬توپ¬هاي انتخاب شده با استفاده از پيونددهنده¬ها بهم متصل شدند. ميزان تمايل اتصال سازه نهايي به مولكول¬هاي MHC و پايداري آنها با استفاده از روش¬هاي داكينگ و ديناميك مولكولي ارزيابي شدند. افزون بر اين قابليت سازه نهايي در تحريك پاسخ¬ ايمني با استفاده از C-ImmSim بررسي شد. واكسن طراحي¬ شده پس از تأييد بيوانفورماتيكي سفارش داده شد. براي ارزيابي عملكرد ايمونولوژيكي واكسن، از موش‌هاي BALB/c استفاده شد و در چهار گروه تقسيم‌بندي شدند: گروه اول PBS (تزريق PBS)، گروه دوم Adjuvant (تزريق ادجوانت فروند)، گروه سوم Peptide (تزريق پپتيد) و گروه چهارم Adj+pep (تزريق پپتيد با ادجوانت فروند). دو هفته بعد از تزريق دوم و سوم، خون¬گيري و كشت سلولي طحال موش¬ها صورت گرفت. به منظور اندازه‌گيري سطوح آنتي‌بادي‌ IgG در سرم و IFN-γ، IL-4 و گرانزيم B در مايع رويي كشت سلولي، از روش الايزا استفاده شد. به عنوان گام نهايي پتانسيل اثرگذاري واكسن بر تكثير لنفوسيت¬هاي طحال با استفاده از MTT بررسي شد. نتايج بيوانفورماتيكي نشان دادند كه HRAMRVAHL و FVCYYLSYY، بالاترين آنتي¬ژنيسيته را داشتند كه براي ساخت سازه نهايي بوسيله AAY بهم ديگر متصل شدند. اين سازه نهايي آنتي¬ژنيك، غير آلرژيك، غير سمي، پايدار و تحريك¬كنندۀ IFN-γ و IL-4 بود. نتايج داكينگ و ديناميك مولكولي نشان دادند كه واكسن مذكور تمايل بالايي را نسبت به مولكول¬هاي MHCموشي و انساني داشت و اتصال آن به اكثر مولكول¬هاي MHC باعث افزايش پايداري آنها شد. نتايج C-ImmSim نشان دادند كه واكسن موجب بروز پاسخ¬ ايمني سلولي شد. نتايج آزمايشگاهي نشان دادند كه واكسن پپتيدي با ادجوانت فروند منجر به افزايش قابل¬توجه سطوح IgG، IFN-γ، IL-4 و گرانزيم B شد، به اين معنا كه واكسن باعث تحريك پاسخ¬هاي ايمني هومورال و سلولي شد.بررسي تكثير لنفوسيت‌هاي طحال نشان داد كه واكسن تأثير بسزايي در افزايش اين سلول¬ها داشت. بر اساس نتايج حاصل، واكسن طراحي ¬شده مي¬تواند نامزد اميدواركننده¬اي ضد سرطان پستان باشد.

230405

دانشگاه اصفهان

مزدك گنجعلي‌خاني حاكمي

زيست فناوري- ميكروبي

حسن محبت كار , ماندانا بهبهاني