انكپسوله كردن فرم نوتركيب آنزيم سوپراكسيد ديسموتاز گياه حرا با الژينات به منظور بررسي رهايش و پايداري آن در سيستم گوارشي شبيه سازي شده جوجه

اصفهان : دانشگاه صنعتي اصفهان

كشاورزي

كارشناسي ارشد

سوپر اكسيد ديسموتاز (SOD) يك آنزيم آنتي اكسيدان است كه براي دفاع فيزيولوژيكي در حيوانات و گياهان در برابر راديكال هاي آزاد و گونه هاي اكسيژن واكنش پذير (ROS) توليد شده از استرس هاي غيرزنده و زنده كارايي فراواني دارد. مكمل سوپر اكسيد ديسموتاز از گياهان در رژيم غذايي پستانداران يك روش جديد از نظر بهبود سلامت در برابر شرايط پاتوژيك مي باشد. راديكال هاي آزاد و گونه هاي اكسيژن فعال اصطلاحات رايجي هستند كه مربوط به پاتوفيزيولوژي سرطان، ديابت، سميت كبدي، ارتروز و بسياري از بيماري هاي شديد ديگر مي شود (گونه هاي فعال اكسيژن) شبيه شمشيرهاي دو لبه است كه مي تواند تكثير سلولي را تنظيم كند يا منجر به آپوپتوز و مرگ سلولي مي شود. حفظ تعادل در غلظت گونه هاي فعال اكسيژن درون سلولي و خارج سلولي مهم مي باشد. هدف از اين پژوهش و تحقيق انكپسوله كردن فرم توتركيب آنزيم سوپراكسيد ديسموتاز (SOD) گياه حرا با آلژينات به منظور بررسي رهايش و پايداري آن در سيستم گوارشي شبيه سازي شده جوجه مي باشد. بدين منظور سويه R-AmSOD1 كه قبلا با انتقال ژن كد كنند AmSOD1Am از گياه حرا به باكتري E.coli (DE3) ساخته شده بود و قابليت توليد آنزيم AmSOD1 را داشت در محيط مناسب كشت داده شد و پس از القا با IPTG اين پروتئين توليد شد. با استفاده از كروماتوگرافي تمايلي اين آنزيم خالص سازي شد و سپس به منظور حذف نمك ايميدازول دياليز صورت گرفت. از طرفي نانو ذره با سديم آلژينات با غلظت (2 ميلي گرم بر ميلي ليتر) با حضور يون كليسيم توليد شد. جهت بارگيري آنزيم فرايند توليد نانودره به همراه پروتئين خالص سازي شده صورت گرفت. به اين ترتيب نانوذرات شاهد ( بدون بارگيري) و نانوذرات بارگيري شده توليد شد. با توجه به كم بودن مقدار آنزيم بارگيري شده با تغييراتي مانند تغيير در غلظت كلسيم مقدار آنزيم بارگيري شده حتي به 50 درصد نيز رسيد. براي بررسي رهايش آنزيم از ورنال بافركه عمدتا جهت سيستم شبيهسازي شده در مرغ مورد استفاده قرار مي گيرد استفاده شد. اين بافر در pH هاي مختلف تهيه گرديد. مقدار رهايش در pH هاي اسيدي در حدود 3 الي 4 درصد بود در حالي كه اين مقدار در pH 5/7 به مقدار 20 درصد افزايش يافت. افزايش رهايش در pH 5/7 كه مطابق با pH در روده جوجه مي باشد نشان مي دهد كه نانوساختار به دست آمده به عنوان يك پوشش مناسب براي انكپسوله كردن پروتئين مي باشد.اين تحقيق مقدمه خوبي براي تحقيقات بعدي در خصوص استفاده از سوپر اكسيد ديسموتاز به عنوان مكمل غذايي در جانوران فراهم مي كند.

219114

بيوتكنولوژي

مهندسي كشاورزي

دانشگاه صنعتي اصفهان