مهندسي ژنتيكي سلول هاي Jurkat با استفاده از سيستم CRISPR/Cas9 و ايجاد سلول هايي با گيرنده ي سلول T (TCR) اختصاصي عليه آنتي ژن NY-ESO-1

لنگرود

چكيده مقدمه: سلول هاي T با TCR مهندسي شده مي توانند براي هدف قرار دادن آنتي ژن هاي سرطاني داخل سلولي كه توسط مجموعه سازگاري بافتي اصلي (MHC) ارائه مي شوند، استفاده گردند. يكي از بزرگترين محدوديت‌هاي اين نوع درمان، جفت شدگي نادرست زنجيره‌هاي TCR اگزوژن (Exogenous) با زنجيره‌هاي TCR اندوژن (Endogenous) است. تكنولوژي CRISPR/Cas9 براي مهندسي ژنتيك سلول‌ها در سلول درماني استفاده شده است. اين تكنيك ويرايش ژنومي را مي توان براي ناك اوت TCR اندوژن در سلول هاي T قبل از معرفي زنجيره هاي TCR اگزوژن مورد استفاده قرار داد. مواد و روش ها: در اين مطالعه، انتقال لنتي ويروسي CRISPR/Cas9 براي اختلال در بيان TCR اندوژن سلول¬هاي Jurkat استفاده شد. اين سلول‌ها با لنتي ويروس‌هاي حامل ترانس ژن يك TCR اگزوژن عليه پپتيد NY-ESO-1 ارائه شده توسط HLA-A*0201 ، ترنسدوس (Transduce) گرديدند. علاوه بر اين، تشخيص آنتي ژن، اتصال و اختصاصي بودن اين سلول هاي Jurkat نيز ارزيابي شد. نتايج: TCR اندوژن با موفقيت در 40% از سلول ها با استفاده از روش مبتني بر CRISPR/Cas9 ناك اوت گرديد. سپس سلول‌هاي TCR-KO انتخاب شدند و با استفاده از وكتورهاي لنتي‌ويروسي در معرض TCR اختصاصي NY-ESO-1 قرار گرفتند. تجزيه و تحليل فلوسايتومتري نشان داد كه تا 55٪ از سلول‌ها TCR اختصاصي NY-ESO-1 را روي سطح سلول بيان مي‌كنند. نتيجه گيري: يك روش پايه اي براي مهندسي سلول‌هاي Jurkat، با استفاده از CRISPR/Cas9 با موفقيت ايجاد شد و سلول‌هايي با TCR مهندسي شده كه ميتوانند يك آنتي ژن توموري خاص را شناسايي كنند، توليد شد. كليد واژه¬ها: NY-ESO-1، گيرنده ي سلول T، سلول TCR-T، كريسپر/Cas9

214479

علوم پزشكي گيلان