طراحي و سنتز ژن كد كننده microRNA15b با روش assembling PCR

رشت

مقدمه: بيماري آلزايمر به عنوان شايع‌ترين دليل زوال عقل در دنيا شناخته مي‌شود و نرخ رشد اين بيماري به گونه‌اي است كه پيش‌بيني مي‌شود تا سال 2030 حدود 75 ميليون نفر در دنيا به اين اختلال مواجه باشند. علي‌رغم پيشرفت علم در حوزه پزشكي، تاكنون هيچ يك از درمان‌هاي موجود قادر به توقف تخريب سلول‌هاي عصبي نبوده و صرفا با افزايش نوروترانسميترها در مغز باعث بهبود علائم بيمار مي‌شوند. امروزه مطالعات زيادي درباره miRNA‌ها به عنوان راهكار درماني نوين بيماري‌ها، ازجمله آلزايمر انجام گرديده است. miRNA‌ها، توالي‌هاي غيركدكننده‌ي 25-18 نوكلئوتيدي هستند كه بيان ژن را پس از رونويسي از طريق مهار ترجمه يا القاي تجزيه كنترل مي‌كنند و نقش تنظيمي در سلول ايفا مي‌كنند. در مطالعات سلولي مشاهده شده است كه، افزايش سطح miRNA-15b منجر به مهار بيان BACE1 شده كه در باعث كاهش توليد پلاك‌هاي بتا آميلوئيدي مي‌گردد.اين مطالعه در راستاي طراحي و سنتز ژن كد كننده miRNA-15b با روش assembly PCR مي‌باشد. مواد و روش ها:با استفاده از بانك اطلاعات ژني miRbase و NCBI، ژن كدكننده‌ي miRNA-15b طراحي گرديده و سپس با كمك نرم‌افزار MFEprimer3.1 به بررسي كمي پرايمرهاي طراحي شده پرداخته و در مرحله بعدي واكنش assembly PCR را براي پرايمرها پياده‌سازي كرديم. در ادامه به منظور بهينه‌سازي تكنيك ترانسفورماسيون، پلاسميد pBR322 استخراج گرديده و توسط آنزيم‌هاي BamHI و ليگاز مورد هضم آنزيمي قرار گرفته و در نهايت با استفاده از روش شوك حرارتي، پلاسميد بهينه شده را با موفقيت در باكتري E.coli JM109منتقل شده است. نتايج: ژن كدكننده طراحي شده توسط تكنيك الكتروفورز تاييديه كيفي مورد نظر را به دست آورد. بهينه‌سازي تكنيك ترانسفورماسيون با استفاده از كشت سلولي و رشد كلوني در محيط داراي آمپي‌سيلين با موفقيت انجام گرديد. نتيجه گيري: با استفاده ژن كدكننده طراحي شده miRNA-15b و تكنيك بهينه گرديده‌ي ترانسفورماسيون، مي‌توان در مطالعات بعدي به اثرات بيان اين miRNA بر روي بيماري آلزايمردر رده‌ي سلول‌هاي عصبي پرداخته شود.

167606

علوم پزشكي گيلان